विषय
उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) प्रयोगशाला विश्लेषण का एक सामान्य तरीका है जिसमें एक नमूना अपने रासायनिक घटकों में अलग हो जाता है क्योंकि यह एक स्तंभ से गुजरता है। यह स्तंभ एक छिद्रपूर्ण सामग्री से भरा हुआ है, आमतौर पर सिलिका जेल। C8 की तरह एक मानक रिवर्स चरण स्तंभ, कभी-कभी दब सकता है या दूषित हो सकता है। इन स्तंभों को बहुत ही सरल तकनीकों का उपयोग करके पुनर्प्राप्त किया जा सकता है।
दिशाओं
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स्तंभ को अलग करें और उसकी स्थिति को उल्टा कर दें, ताकि मोबाइल चरण अब प्रवेश कर रहा है जो सामान्य रूप से स्तंभ का उत्पादन है। स्तंभ के दूसरे छोर पर एक आउटलेट संलग्न करें (जो मूल प्रविष्टि थी), और इसे एक निर्वहन में सूखा दें।
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ध्रुवीयता कम करने के क्रम में सॉल्वैंट्स की एक श्रृंखला को पंप करें। एक अनुशंसित मूल श्रृंखला मेथनॉल से शुरू होती है, फिर एसिटोनिट्राइल, फिर एसिटोनिट्राइल / आइसोप्रोपानोल (75:25), आइसोप्रोपैनोल, मिथाइलीन क्लोराइड और हेक्सेन पर स्विच होती है। यदि स्तंभ में था मोबाइल चरण शोषक था, तो मेथनॉल में पानी के साथ एक मार्ग की सिफारिश की जाती है। प्रति मिनट एक से दो मिलीलीटर का प्रवाह पर्याप्त है, और प्रत्येक विलायक के लगभग दस मात्रा स्तंभों को पंप किया जाना चाहिए। वॉल्यूम स्तंभ स्तंभ का आंतरिक स्थान है, और इसकी गणना (0.7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L) द्वारा की जाती है, जहां DI स्तंभ का आंतरिक व्यास है और L लंबाई है।
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मूल मोबाइल चरण के साथ उपयोग के लिए इसे तैयार करने के लिए स्तंभ के माध्यम से आइसोप्रोपैनॉल के दस अन्य संस्करणों को पंप करें। यदि मूल मोबाइल चरण को कुशन किया गया है, तो मूल मोबाइल चरण पर लौटने से पहले, इसोप्रोपैनोल के बाद स्तंभ के माध्यम से पानी को पंप करें।
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स्तंभ को विघटित करें, इसे उल्टा करें और फिर से संलग्न करें ताकि यह अपनी मूल स्थिति में हो (ताकि चल चरण स्तंभ के दाईं ओर प्रवेश करता है)। डिटेक्टर को स्पीकर आउटपुट को फिर से कनेक्ट करें।
स्तंभ पुनर्प्राप्त कर रहा है
युक्तियाँ
- यदि यह प्रक्रिया स्तंभ को पूरी तरह से साफ नहीं करती है, तो डाईमेथिल सल्फ़ोक्साइड (डीएमएसओ) और डाइमिथाइल फॉर्मामाइड (डीएमएफ) के 50:50 मिश्रण का उपयोग किया जा सकता है। प्रोटीन और धातु आयनों के अवशेषों को अन्य प्रकार के सॉल्वैंट्स की आवश्यकता हो सकती है, जैसे आयन-स्पैरिंग अभिकर्मक या एथिलीन डायमाइन टेट्रा-एसिटिक एसिड (EDTA) का एक समाधान।
चेतावनी
- कुछ उपकरणों में, इनलेट के रूप में रीढ़ की खुरदरी धातु की छलनी होगी। इस मामले में, स्तंभ को फिर से भरने से स्थिर चरण को स्तंभ छोड़ने की अनुमति मिलेगी, और यह अनुशंसित नहीं है। अगर आपको यकीन नहीं है तो अपने डीलर से सलाह लें।
- इस प्रक्रिया में उपयोग किया जाने वाला विलायक संभावित रूप से विषाक्त होता है जब निगला जाता है और साँस लिया जाता है। संभालते समय सामान्य प्रयोगशाला सावधानियों का उपयोग करें।
आपको क्या चाहिए
- एचपीएलसी डिवाइस
- पानी
- मेथनॉल
- acetonitrile
- isopropanol
- मिथाइलीन क्लोराइड
- हेक्सेन
