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कोल्ड अल्कोहल का उपयोग पानी आधारित समाधानों से डीएनए को अलग करने के लिए किया जाता है, जिससे बाद के आनुवंशिक परीक्षण के लिए इसे शुद्ध किया जा सके। डीएनए युक्त घोल में अल्कोहल मिला देना, इसे कम तापमान पर शुद्ध बनाने का एक सरल तरीका है और इसे ख़राब करने वाले एंजाइम को धीमा कर देता है, जिससे अधिक सटीक परिणाम मिलते हैं।
ब्रेकिंग सेल दीवारों
शुद्ध डीएनए प्राप्त करने के लिए निष्कर्षण प्रक्रियाओं के लिए ऊतक के सभी आणविक और रासायनिक घटकों से छुटकारा पाना होता है जिससे डीएनए निकाला जाता है। पहले चरणों में सेल की दीवारों का विनाश शामिल है। यह विभिन्न रासायनिक एजेंटों के साथ किया जा सकता है जो कोशिका झिल्ली के लिए कास्टिक हैं लेकिन डीएनए को नुकसान नहीं पहुंचाते हैं। झिल्ली को नष्ट करने के लिए कोशिकाओं को ध्वनिबद्ध, समरूप या मिल्ड भी किया जा सकता है।
लिपिड निकालना
सेल की दीवारें नष्ट हो जाने के बाद, सेल झिल्ली बनाने वाले वसा और तेल से छुटकारा पाने के लिए एक डिटर्जेंट जोड़ा जाता है। डिटर्जेंट घोल में तेल और वसा के विघटन का कारण बनते हैं।
प्रोटीन निकालना
समाधान में प्रोटीज जोड़कर प्रोटीन और एंजाइम को पचाया जा सकता है। प्रोटीज प्रोटीन को छोटे पेप्टाइड और अमीनो एसिड में तोड़ देते हैं।
प्रेपिसिटिंग डीएनए
एक समाधान के लिए बर्फ कोल्ड अल्कोहल के अलावा डीएनए को उपजीवन और समग्र करेगा। नमूने को सेंट्रीफ्यूग करके और तरल परत को डिकेंट करके आनुवंशिक सामग्री को एकत्र किया जा सकता है। यह अपकेंद्रित्र ट्यूब के तल पर एक छोटे तलछट के रूप में मौजूद होना चाहिए।
डीएनए को शुद्ध करना
डीएनए को एक ठंडे शराब समाधान में फिर से निलंबित करके और बहुत शुद्ध नमूना प्राप्त करने के लिए कई बार फिर से सेंट्रीफ्यूज करके धोया जा सकता है। प्रयुक्त अल्कोहल में इथेनॉल और आइसोप्रोपैनोल शामिल हैं। यह प्रक्रिया कठोर परीक्षणों में बहुत शुद्ध नमूना छोड़ती है।
