विषय
उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) एक उपकरण है जिसका उपयोग मिश्रण से पदार्थों को अलग करने के लिए किया जाता है। कुछ रसायनों की जुदाई और पहचान मुख्य रूप से सिस्टम के क्रोमैटोग्राफिक कॉलम में होती है। कई स्तंभ प्रकार CLAE के लिए उपलब्ध हैं, और प्रत्येक का उपयोग एक विशेष प्रकार के विश्लेषण के लिए किया जाता है। C18 कॉलम आमतौर पर इस्तेमाल किया जाने वाला सबसे मजबूत नॉनपोलर है। समय की विस्तारित अवधि के लिए निरंतर उपयोग के बाद, इसके माध्यम से विलायक की प्रवाह दर कम हो जाती है और विश्लेषण समय बढ़ जाता है। विश्लेषण के समय में कमी का एक अन्य कारण उन नमूनों में है जो स्तंभ सामग्री में कम मात्रा में रसायनों को छोड़ते हैं, उन्हें अलग करने की क्षमता को कम करते हैं। इसकी सतह की बहाली किसी भी शेष नमूनों से इसे साफ करने और सहायक सामग्री को पुनर्जीवित करने के लिए विशिष्ट सॉल्वैंट्स की एक श्रृंखला के साथ सामग्री का इलाज करके किया जा सकता है।
चरण 1
स्तंभ C18 को प्रवाह दिशा से निकालें और इसे विपरीत दिशा में रखें। इसके माध्यम से विलायक वापस प्राप्त करना समय के साथ होने वाले संचय प्रभाव को कम करेगा। ध्यान रहे कि कॉलम के अंत में बहुत अधिक सामग्री जमा न हो। कुछ कारखाने शीर्ष पर एक बड़े जाल का उपयोग करते हैं ताकि जब प्रवाह दिशा बदलता है, तो मेष नीचे की स्थिति में होता है। पुनर्स्थापना की इस पद्धति को फ्लो रिवर्सल कहा जाता है। बिल्डअप को सिस्टम डिटेक्टर से बहने से रोकने के लिए और संभवतः एक अवरोध पैदा करने के लिए, इसे जुड़े हुए डिटेक्टर के बिना कार्य करने की अनुमति दें और कॉलम से निपटान तक प्रवाह को निर्देशित करें।
चरण 2
विपरीत दिशा में स्तंभ में बनाए किसी भी यौगिक को मिटाने के लिए सॉल्वैंट्स की एक श्रृंखला में विलायक मार्ग ट्यूब रखें। ये सॉल्वैंट्स उनकी हाइड्रोफिलिक विशेषताओं में भिन्न होते हैं। उन्हें अलग करके, आप समान रूप से विविध हाइड्रोफिलिक प्रकृति के यौगिकों को समाप्त कर देंगे। निम्नलिखित सॉल्वैंट्स में से प्रत्येक के 50 मिलीलीटर का उपयोग करें, क्रमिक रूप से: पानी (यदि आप एक बफर का उपयोग कर रहे हैं), मेथनॉल, आइसोप्रोपेनॉल, डाइक्लोरोमेथेन, हेक्सेन, डाइक्लोरोमेथेन और आइसोप्रोपानोल।
चरण 3
कॉलम को सही दिशा में बदलें और इसके माध्यम से अपना विलायक प्रवाह बनाएं। आगे बढ़ने से पहले इसे धोने के लिए कम से कम 75 मिलीलीटर का उपयोग करें। जब आप नए थे तब एक पैटर्न के साथ इसका परीक्षण करें और परिणाम जांचें। अधिकतम अवधारण बिंदुओं और कुल विश्लेषण समय तक पहुंचने पर ध्यान दें। जिस हद तक ये विशेषताएँ प्रारंभिक परीक्षण से मेल खाती हैं, जब यह नया था तब यह इंगित करेगा कि स्तंभ किस डिग्री पर बहाल किया गया था। यदि परिणाम संतोषजनक नहीं हैं, तो कॉलम को नए से बदलें और पुराने को फेंक दें।
